Согласно инструкции Министерства сельского хозяйства СССР по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных (М.: «КОЛОС», 1981, с. 61-66) сперму быка, замороженную в форме гранул объемом 0,1-0,2 мл (доза) оттаивают следующим образом: одну гранулу, взятую из канистры сосуда Дьюара охлaжденным металлическим корнцангом или большим пинцетом с полиэтиленовыми или резиновыми трубками на концах, помещают в чистый, стерильный флакон или ампулу с 1 мл 2,9 % -го раствора аммоннокислого натрия, предварительно подогретого на водяной бане до температуры 40-420. Флакон или ампулу, не доставая из воды, осторожно покачивают до растаивания гранул, после чего сразу вынимают из воды и ставят на стол при комнатной температуре (18-20). Гранулы объемом 0,1-0,2 мл оттаивают за 5-8 с.
Для оттаивания спермы, замороженной в гранулах объемом 0,5 мл, две гранулы (доза) кладут во флакон, предварительно помещенный в сосуд с теплой водой (40-45 градусов), Не вынимая из воды, флакон осторожно вращают круговыми движениями до растаивания гранул, после чего вынимают из воды и ставят на стол при комнатной температуре. Время оттаивания двух гранул - 1,5-2 мин. Категорически запрещается оттаивать гранулы при комнатной температуре.
Оттаивание спермы в полипропиленовых соломинках (капиллярах, пайеттах) проводят в водяной бане при температуре 380 в течение 10-11 с. За это время сперма достигает температуры 00.
Независимо от формы замораживания сперму используют для осеменения в течение 15 мин после оттаивания.
На пунктах искусственного осеменения сперму оценивают по подвижности и выживаемости спермиев. Для оценки по подвижности применяют специальные термостаты или нагревательные столики с автоматическим регулированием температуры. На чистое предметное стекло стерильной стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю спермы, покрывают ее чистым покровным стеклом и просматривают под микроскопом при увеличении в 120-180 раз в неярком освещении. Подвижность спермиев оценивают по десятибалльной шкале. При 10 баллах все 100 % спермиев имеют прямолинейно-поступательное. движение, при 9 - примерно 9 из 10 (т. е. 90 %) и т. д. Замороженная сперма быка должна соответствовать минимальным требованиям по подвижности спермиев - 3 баллам (30 % спермиев с прямолинейно-поступательным движением).
Для определения выживаемости спермиев две дозы спермы одного быка ставят на инкубацию в автоматическую водяную баню при температуре 38 градусов Цельсия. Оценивают исходную (сразу после оттаивания) подвижность спермиев. Через 5 ч оценку повторяют. Пригодной для осеменения считают сперму, исходная подвижность спермиев в которой не менее 3 баллов и выживаемость 5 ч.
