Определение содержания белка в молоке с краской оранж Ж
Метод основан на способности белков молока связываться и осаждаться кислой сульфокраской оранж Ж. В кислой среде молекула белка заряжается положительно и связывается с отрицательно заряженными остатками сульфокислоты, входящей в молекулу краски оранж Ж. Образовавшийся белково-оранжевый комплекс осаждается в форме нерастворимого осадка.
Для определения этим методом используются суточные или двухсуточные пробы молока, которые могут быть законсервированы 40%-ным формалином.
В колбочку или стакан емкостью 100-150 мл наливают из бюретки или пипеткой 25 мл раствора краски оранж Ж и добавляют 1,5 мл молока. Содержимое перемешивают в течение 15 с и оставляют на 30 мин. Затем жидкость отфильтровывают через бумажный фильтр (следует пользоваться бумагой одной и той же плотности, диаметр фильтра - 11 см). Полученный фильтрат используют для определения его оптической плотности на фотоэлектроколориметре ФЭК-М с синим светофильтром. Сравнение проводится со стандартным раствором краски. Для испытуемого фильтрата и раствора краски используют кюветы одинакового размера (расстояние между гранями 1,05-1,055 мм). В две кюветы наливают стандартный раствор краски и, поставив одну кювету в левый барабан, другую - в правый, устанавливают нулевое положение прибора. После этого из кюветы, находившейся в правом барабане, выливают краску, споласкивают ее испытуемым фильтратом, затем наливают его, и кювету ставят в правый барабан, кювета с раствором краски остается в левом барабане. Определяют разность оптической плотности раствора краски и испытуемого фильтрата. Отсчет показаний оптической плотности (экстинкции) испытуемых фильтратов ведут на левом барабане. После определения экстинкций в 20--30 образцах необходимо проверить нулевое положение прибора, используя стандартный раствор краски.
Для установления процента белка в молоке результаты оптической плотности (экстинкции) образцов фильтрата умножают на коэффициент, устанавливаемый для каждой партии краски и определенного прибора ФЭК-М. Коэффициент проверяется каждый квартал.
Приготовление стандартного раствора краски оранж Ж. Точно отвешивают 1 г краски и 21 г лимонной кислоты, переносят их в мерную литровую колбу, добавляют дистиллированную воду (2/з колбы), тщательно перемешивают и после полного растворения краски объем доводят до метки дистиллированной водой. Вместо 21 г лимонной кислоты можно добавлять 250 мл 0,1 Н соляной кислоты. Этот раствор готовится из концентрированной химически чистой соляной кислоты (табл. 6). Для сохранения раствора краски длительное время его консервируют, добавляя 2,5 мл 10 %-ного спиртового раствора тимола на каждый литр раствора краски.
|
Плотность НCl
|
Процент НCl
|
Требуется мл на 10 л 0,1 Н раствора
|
Плотность НCl
|
Процент НCl
|
Требуется мл на 10 л 0,1 Н раствора
|
|
1,163
|
32,10
|
113,59
|
1,180
|
35,39
|
103,03
|
|
1,165
|
32,49
|
112,22
|
1,185
|
36,31
|
100,41
|
|
1,170
|
33,46
|
108,97
|
1,190
|
37,23
|
97,93
|
|
1,171
|
33,65
|
108,36
|
1,195
|
38,16
|
95,55
|
|
1,175
|
34,42
|
105,93
|
1,200
|
39,11
|
93,23
|
Вычисление коэффициента для краски. 100-150 г краски растирают небольшими порциями в фарфоровой ступке, переносят в банку из темного стекла с притертой пробкой, тщательно перемешивают и устанавливают для нее коэффициент. С этой целью берут 10 - 15 проб молока от различных коров и тремя параллельными исследованиями определяют содержание в них белка методом Кьельдаля. В этих же пробах молока определяют оптическую плотность после адсорбции краски белком (в фильтратах) на ФЭК-М (экстинкции). Данные о содержании белка, полученные методом Кьельдаля, делят на показания экстинкций тех же образцов молока и получают коэффициент (средний по всем пробам). Например, содержание белка по Кьельдалю -- 3,38 %, экстинкция - 0,31. Следовательно, коэффициент будет равен 10,9 (3,38: 0,31).
