Определение содержания белка в молоке

3596

Определение содержания белка в молоке с краской оранж Ж

Метод основан на способности белков молока связываться и осаждаться кислой сульфокраской оранж Ж. В кислой среде молекула белка заряжается положительно и связывается с отрицательно заряженными остатками сульфокислоты, входящей в молекулу краски оранж Ж. Образовавшийся белково-оранжевый комплекс осаждается в форме нерастворимого осадка.

Для определения этим методом используются суточные или двухсуточные пробы молока, которые могут быть законсервированы 40%-ным формалином.

В колбочку или стакан емкостью 100-150 мл наливают из бюретки или пипеткой 25 мл раствора краски оранж Ж и добавляют 1,5 мл молока. Содержимое перемешивают в течение 15 с и оставляют на 30 мин. Затем жидкость отфильтровывают через бумажный фильтр (следует пользоваться бумагой одной и той же плотности, диаметр фильтра - 11 см). Полученный фильтрат используют для определения его оптической плотности на фотоэлектроколориметре ФЭК-М с синим светофильтром. Сравнение проводится со стандартным раствором краски. Для испытуемого фильтрата и раствора краски используют кюветы одинакового размера (расстояние между гранями 1,05-1,055 мм). В две кюветы наливают стандартный раствор краски и, поставив одну кювету в левый барабан, другую - в правый, устанавливают нулевое положение прибора. После этого из кюветы, находившейся в правом барабане, выливают краску, споласкивают ее испытуемым фильтратом, затем наливают его, и кювету ставят в правый барабан, кювета с раствором краски остается в левом барабане. Определяют разность оптической плотности раствора краски и испытуемого фильтрата. Отсчет показаний оптической плотности (экстинкции) испытуемых фильтратов ведут на левом барабане. После определения экстинкций в 20--30 образцах необходимо проверить нулевое положение прибора, используя стандартный раствор краски.

Для установления процента белка в молоке результаты оптической плотности (экстинкции) образцов фильтрата умножают на коэффициент, устанавливаемый для каждой партии краски и определенного прибора ФЭК-М. Коэффициент проверяется каждый квартал.

Приготовление стандартного раствора краски оранж Ж. Точно отвешивают 1 г краски и 21 г лимонной кислоты, переносят их в мерную литровую колбу, добавляют дистиллированную воду (2/з колбы), тщательно перемешивают и после полного растворения краски объем доводят до метки дистиллированной водой. Вместо 21 г лимонной кислоты можно добавлять 250 мл 0,1 Н соляной кислоты. Этот раствор готовится из концентрированной химически чистой соляной кислоты (табл. 6). Для сохранения раствора краски длительное время его консервируют, добавляя 2,5 мл 10 %-ного спиртового раствора тимола на каждый литр раствора краски.

Таблица 6

Приготовлении 0,1 Н раствора соляной кислоты из концентрированной

Плотность НCl	Процент НCl	Требуется мл на 10 л 0,1 Н раствора	Плотность НCl	Процент НCl	Требуется мл на 10 л 0,1 Н раствора
1,163	32,10	113,59	1,180	35,39	103,03
1,165	32,49	112,22	1,185	36,31	100,41
1,170	33,46	108,97	1,190	37,23	97,93
1,171	33,65	108,36	1,195	38,16	95,55
1,175	34,42	105,93	1,200	39,11	93,23

Вычисление коэффициента для краски. 100-150 г краски растирают небольшими порциями в фарфоровой ступке, переносят в банку из темного стекла с притертой пробкой, тщательно перемешивают и устанавливают для нее коэффициент. С этой целью берут 10 - 15 проб молока от различных коров и тремя параллельными исследованиями определяют содержание в них белка методом Кьельдаля. В этих же пробах молока определяют оптическую плотность после адсорбции краски белком (в фильтратах) на ФЭК-М (экстинкции). Данные о содержании белка, полученные методом Кьельдаля, делят на показания экстинкций тех же образцов молока и получают коэффициент (средний по всем пробам). Например, содержание белка по Кьельдалю -- 3,38 %, экстинкция - 0,31. Следовательно, коэффициент будет равен 10,9 (3,38: 0,31).

Возврат к списку статей

Разделы

Статьи по теме

Все статьи