Определение бактериальной обсемененности молока по редуктазной пробе.
Метод основан на способности фермента редуктазы, выделяемого микроорганизмами, обесцвечивать или восстанавливать краситель метиленовый синий или резазурин. Для выполнения анализа требуется редуктазник или термостат, пробирки диаметром 22 мм. резиновые пробки к ним, пипетки на 1,20 мл, 96%-ный этиловый спирт, метиленовый синий (МРТУ-6-09-29-76) или резазурии (ТУ-6-09-210-70) , дистиллированная вода. Перед анализом посуду и пробки кипятят в дистиллированной воде в течение 30 мин или хлорируют с последующим ополаскиванием прокипяченной водой.
Проба на редуктазу с метиленовым синим (табл. 1).
В стерильныe пробирки наливают по 1 мл рабочего раствора метиленового синего и по 20 мл исследуемого молока, закрывают пробками и смешивают медленным трехкратным переворачиванием пробирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды 380, чтобы уровень ее был немного выше уровня молока в пробирках, или ставят в химический стакан с водой температурой 380, помещенный в термостат. Время погружения пробирок в редуктазник или стакан с водой в термостат считают началом анализа. За изменением окраски наблюдают через 20 мин, через 2 ч, через 5,5 ч от начала анализа. Время обесцвечивания молока - окончание анализа. Остающееся около 1 см окрашенное кольцо вверху или внизу пробирки в расчет не принимается. Чем больше содержится микроорганизмов в молоке, тем быстрее обесцвечивается проба.
Приготовление раствора метиленового синего. 10 г метиленового синего смешивают со 100 мл 96 % -ного этилового спирта, закрывают плотно пробкой и выдерживают в термостате при 370 24 ч, затем фильтруют. Для приготовления рабочего раствора к 5 мл основиого профильтрованного раствора добавляют 195 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают. Срок хранения рабочего раствора не более 7 суток.
Проба на редуктазу с резазурином (ускоренная).
Таблица 1
Оценка качества молока по пробе на редуктазу
Продолжительность обесцвечивания |
Количество бактерий в 1 мл молока. |
Класс молока |
Оценка качества молока |
Свыше 5 час.30 мин |
Менее 500 тыс. |
1 |
Хорошее |
С 2 ч.до 5 часов 30 мин |
От 500 тыс. до 4 млн. |
II |
Удовлетворительное |
Свыше 20 мин. До 2 ч. |
От 4 млн. до 20 млн. |
III |
Плохое |
20 мин и менее |
20 млн. и выше. |
IV |
Очень плохое |
Приготовление раствора резазурина (табл. 2). Основной раствор - 100 мг резазурина, растворенного в 200 мл прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды, следует хранить не более 20 суток при температуре 3-50. Рабочий раствор резазурина готовят из основного, разбавляя его прокипяченной и охлажденной дистиллированной водой в 10 раз. Например, 5 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Рабочий раствор содержит 0,005 % резазурина, срок хранения его не более 7 суток при температуре не выше 8-100. Основной и рабочий растворы резазурина хранят в склянках из темного стекла.
Таблица 2
Оценка качества молока по пробе на редуктазу с резазурином
Продолжительность изменения цвета |
Окраска молока |
Количество бактерий в 1 мл молока |
Класс молока |
Оценка качества молока |
Через 1 ч |
Сине - стальная |
Менее 500 тыс. |
1 |
Хорошее |
Через 1ч |
Сиреневая или сине-феолетовая |
от 500 тыс. до 4 млн. |
II |
Удовлетворительное |
Через 1 ч |
Розовая или белая |
От 4 млн. до 20 млн. |
III |
Плохое |
До 20 мин |
Белая |
Свыше 20 млн. |
IV |
Очень плохое |
-
-
-
Оценка мясной продуктивности КРС -
-
-
-