Определение бактериальной обсемененности молока по редуктазной пробе.

Метод основан на способности фермента редуктазы, выделяемого микроорганизмами, обесцвечивать или восстанавливать краситель метиленовый синий или резазурин. Для выполнения анали­за требуется редуктазник или термостат, пробирки диаметром 22 мм. резиновые пробки к ним, пипетки на 1,20 мл, 96%-ный этиловый спирт, метиленовый синий (МРТУ-6-09-29-76) или резазурии (ТУ-6-09-210-70) , дистиллированная вода. Перед анализом посуду и пробки кипятят в дистиллированной воде в течение 30 мин или хло­рируют с последующим ополаскиванием прокипяченной водой.

Проба на редуктазу с метиленовым синим (табл. 1).

 В стериль­ныe пробирки наливают по 1 мл рабочего раствора метиленового си­него и по 20 мл исследуемого молока, закрывают пробками и смеши­вают медленным трехкратным переворачиванием пробирок. Пробир­ки помещают в редуктазник с температурой воды 380, чтобы уровень ее был немного выше уровня молока в пробирках, или ставят в хи­мический стакан с водой температурой 380, помещенный в термостат. Время погружения пробирок в редуктазник или стакан с водой в термостат считают началом анализа. За изменением окраски наблю­дают через 20 мин, через 2 ч, через 5,5 ч от начала анализа. Время обесцвечивания молока - окончание анализа. Остающееся около 1 см окрашенное кольцо вверху или внизу пробирки в расчет не принимается. Чем больше содержится микроорганизмов в молоке, тем быстрее обесцвечивается проба.

Приготовление раствора метиленового синего. 10 г метиленово­го синего смешивают со 100 мл 96 % -ного этилового спирта, закры­вают плотно пробкой и выдерживают в термостате при 370 24 ч, затем фильтруют. Для приготовления рабочего раствора к 5 мл основиого профильтрованного раствора добавляют 195 мл дистилли­рованной воды и хорошо перемешивают. Срок хранения рабочего рас­твора не более 7 суток.

Проба на редуктазу с резазурином (ускоренная).

                                                                                                                                                         Таблица 1

Оценка качества молока по пробе на редуктазу

Приготовление раствора резазурина (табл. 2). Основной раст­вор - 100 мг резазурина, растворенного в 200 мл прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды, следует хранить не более 20 суток при температуре 3-50. Рабочий раствор резазурина гото­вят из основного, разбавляя его прокипяченной и охлажденной ди­стиллированной водой в 10 раз. Например, 5 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки дистиллиро­ванной водой. Рабочий раствор содержит 0,005 % резазурина, срок хранения его не более 7 суток при температуре не выше 8-100. Основной и рабочий растворы резазурина хранят в склянках из тем­ного стекла.

Таблица 2

Оценка качества молока по пробе на редуктазу с резазурином